2019考研臨床醫學考研大綱已經公布，下面是新文道老師楊凈為考生帶來的解析：生物化學部分第三講!

第一章 蛋白質的結構及功能

第四節 蛋白質的理化性質

一、蛋白質的分離純化

1.透析 利用透析袋把大分子蛋白質與小分子化合物分開的方法。

2.超濾法 應用正壓或離心力使蛋白質溶液透過有一定截留分子量的超濾膜，達到濃縮蛋白質溶液的目的。

3.丙酮沉淀 必須在0～4℃低溫下進行，丙酮的體積10倍于蛋白質溶液體積;蛋白質沉淀后應迅速分離，否則將發生變性。也可使用乙醇沉淀。

4.鹽析 硫酸銨、硫酸鈉或氯化鈉等中性鹽放入蛋白質溶液中，破壞水化膜并中和表面電荷，導致蛋白質膠體的穩定因素去除而沉淀(一般無蛋白質的變性)。各種蛋白質鹽析時所需鹽濃度和pH值均不同。(2011A25)

5.免疫沉淀法 利用特異抗體識別相應的抗原蛋白，形成抗原抗體復合物，從蛋白質混合溶液中分離獲得抗原蛋白。

6.電泳 蛋白質在高于或低于其等電點的溶液中，受到電場力的作用向正極或負極泳動。注：聚丙烯酰胺凝膠電泳時，蛋白質的泳動速度取決于蛋白質的分子量、分子形狀、溶液的PH值、溶液的離子強度。(1993X135)

7.層析 待分離蛋白質溶液(流動相)經過一個固態物質(固定相)時，根據溶液中待分離的蛋白質顆粒大小、電荷多少及親和力等，使待分離的蛋白質在兩相中反復分配，并以不同速度流經固定相而達到分離蛋白質的目的。注：凝膠過濾又稱分子篩層析。層析柱內填滿帶有小孔的顆粒，一般由葡聚糖制成。蛋白質溶液加與柱之頂部，任其往下滲漏，小分子蛋白質進入孔內，因而在柱中滯留時間較長，大分子蛋白質不能進入孔內而徑直流出，因此不同大小的蛋白質得以分離。(1993A20、2000A20)

8.超速離心法 既可以用來分離純化蛋白質，也可以用作測定蛋白質的分子量。蛋白質在離心場中的行為用沉降系數表示，沉降系數與蛋白質的密度和形狀相關。

注：Sanger當年用二硝基氟苯與多肽鏈的α-氨基作用生成二硝基苯氨基酸，然后將多肽水解，分離出帶有二硝基苯基的氨基酸。目前多用丹磺酰氨使之生成丹酰衍生物，該物質具有強烈熒光，更易鑒別。(2001A20)

根據分子量大小分離純化：透析、超濾、凝膠過濾。

根據電荷不同分離純化：電泳、離子交換層析。

根據沉淀和溶解度的不同(破壞水化膜)分離純化：丙酮沉淀、鹽析、免疫沉淀法。

高分必備

蛋白質變性后——溶液黏度增加?溶解度降低?結晶能力消失?生物活性喪失，易被蛋白酶水解?(聯想一下煮雞蛋)。

DNA變性后——溶液黏度降低?DNA在260nm處的吸光度增加(增色效應)。

蛋白質變性后空間構象被破壞，但一級結構不受影響，部分蛋白質變性后可以復性。

蛋白質水解時，一級結構被破壞，所有蛋白質水解后均不能復性。

分子篩層析——小的流不出，大的下的快。

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